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第一人偶:水银灯(すいぎんとう/スィギントウ)Mercury Lampe CV：田中理恵/能登麻美子
蔷薇少女系列的第一人偶，人工精灵是美美(メイメイ)。自视甚高，有著残忍孤傲的个性，对其他人偶并不看在眼里，总以“笨蛋”(おバカさん)称呼，但对于“junk”一词非常反感。由于对父亲的爱，对在爱丽丝游戏中获胜成为爱丽丝有极大的执著，不惜伤人也要达到目的，视真红为眼中钉，对于前次与真红战斗所间隔的时间能分秒不差的说出来(586920小时又37分钟，约67年)。主要的武器也是最大的特色来自于背部翅膀上的黑色羽毛，方式类似于真红的蔷薇花瓣，然而在动画中黑羽毛还可以变化成剑，甚至翅膀会形成巨大的黑龙，同时也有与真红类似的人偶操控能力，但似乎是强制性的。造型是哥德萝莉(ゴシック アンドロリータ)，由于造型跟声优的关系，人气也相当高(田中理惠也曾亲自cosplay过水银灯)。在动画一期中并没有媒介作为力量来源，然而战斗能力已经可以跟真红等人平分秋色，到动画二期第六话“天使”与柿崎惠订下契约(漫画则尚未订契约)，相对于其他人而言，小惠对于水银灯是个特别的存在。在动画一期第八话“苍星石”中因为曾经对柴崎爷爷说出“有摄取乳酸菌吗？”而成为许多同人画家恶搞成为养乐多代言人。
第二人偶:金丝雀(カナリア)Kanarienvogel CV：志村由美/无登场
玫瑰少女系列的第二人偶，人工精灵是(ピチカート)。自称为蔷薇少女中第一头脑派的策士，但自身的行动与最后的结果往往背道而驰而失败，自认超出预想之外。为了抢夺真红等人的蔷薇圣母而试图入侵樱田家，然而失败无数次。战斗方式为使用小提琴演奏出带有攻击能力的音波进行攻击，已知的招式有“第一乐章 攻击的华尔滋”(攻撃のワルツ)、“第二乐章 追击的卡农”(追撃のカノン)、“不协和音”(ディスコード)、“反击的变奏曲”(反撃のパルティータ)与“最终乐章 破坏的交响曲”(破壊のシンフォニー)，令人意外的有著很高的战斗能力(动画二期第七话)。媒介是小美，也非常喜欢小美。喜欢野餐，特别爱吃日式煎蛋(玉子焼き)。是最常使用人工精灵的人偶，随时带在身边并常常跟他说话或讨论战术，因此默契也相当好。金糸雀说话会有严重的“...かしら？”的语癖，近似于中文“..吗？”“..吧？”疑问句尾助词，但同样多数为无意义的，是金糸雀相当显著的人格特质之一。
第三人偶:翠星石(すいせいせき/スィセイセキ)Jade Stern CV：桑谷夏子/水树奈奈
玫瑰少女系列的第三人偶。人工精灵是(スィドリーム)，典故出自萧志美(Anna Sui)的品牌香水Sui Dream。跟第四作的苍星石是 双子人偶，两眼不同色右眼是红宝石色左眼是翡翠绿，服饰是巴伐利亚风的造形，能力是“园丁的如雨露”(庭师の如雨露)，给与心之树养份让它成长，与苍星石的园丁之剪是一对，合称“梦之园丁”(梦の庭师)，可以使用人工精灵开启梦境之门。战斗时主要将注满的如雨露洒出甘泉，所及之处的植物会快速成长成巨大的藤蔓困住敌人的行动。是第二个与纯订下契约的人偶，有著对陌生人会感到害怕的小动物性格，表面上看来文静但说话却相当狠毒，对刚见面的纯就叫他“小鬼头”(チビ)，自己却躲在皮箱后面。个性并不老实，来到樱田家后常常对纯跟雏莓恶作剧，因此被纯称为“黑心人偶”(性恶人形)(所以有人叫她腹黑石)，然而虽然常常表现出坏心的一面，但是内心其实是很善良的，对于战斗也总是无法狠下心肠(然而在动画中把她坏心的一面更发扬光大了，也因此更加活跃)。翠星石虽然嘴巴上得理不饶人，总是数落纯，然而却是最在意纯的人偶，是标准“外冷内热”(ツンデレ)系，在纯心情低落的时候会默默烤饼干给他打气(漫画第31话)，面对纯跟真红的亲近会小小的吃醋闹别扭而试图作家事来搏取纯的好感(漫画第24话或动画二期第5话)。对于作点心相当上手，同时也是冲烘培茶的能手(动画二期第四话)，但似乎不懂得如何使用微波炉与吸尘器而搞的一团乱(动画二期第五话或漫画第24话)。翠星石说话会有严重的“...ですぅ”的语癖，近似于中文“...的说”，但多数为无意义的句尾助词，是翠星石相当显著的人格特质之一。
第四人偶:
苍星石(そうせいせき/ソウセイセキ)Lapislazuli Stern CV：森永理科/无登场
玫瑰少女系列的第四人偶。人工精灵是雷比卡(レンピカ)，典故出自法国品牌香水Lolita Lempicka，这款香水的特色是分为女用与男用二种。翠星石的双子妹妹，也是两眼不同色但跟翠星石左右相反，穿著男装，能力是除去妨碍心之树成长的杂草的“园丁之剪”(庭师の铗)，战斗也是使用园丁之剪进行攻击，同样也能使用人工精灵开启梦境之门。虽与翠星石为双子但是个性却大不相同，有著成熟与冷静的思绪，对主人(媒介)的忠诚度很高。在漫画原作的媒介是结菱一叶而动画版是柴崎元治。
第五人偶:
真红(しんく/シンク)Reiner Rubin CV：泽城美雪/堀江由衣
玫瑰少女系列的第五人偶，人工精灵是荷里耶(ホーリエ)。为本作的第一女主角，有著湛蓝的双朣，长度及地的金发双马尾，身穿鲜红洋装的抢眼造型。是与樱田纯第一个缔结契约的蔷薇少女，个性高傲，自尊心强，有女王般的气质(同人间的绰号是真红女王殿下)，对其他人说话大都用命令的口气，将纯与雏莓视为仆人，在樱田家的人偶中是领导者的存在，经常是冷静沉著的态度。主要的攻击武器是从手心吹出的玫瑰花办，拥有与人偶心灵沟通的能力，必要时也能让人偶行动，以及让物体的时间发条倒转的特殊能力，经常用在樱田家被破坏的玻璃窗，在平常时则使用马尾攻击，在漫画中已进化到使用陀螺式旋转攻击复数对象(漫画第31话)。特别爱喝红茶，对于红茶的泡法相当讲究，也有自己准备的专属红茶杯组，平常喜欢看德文小说，书本几乎不离手，最喜欢看“名侦探库库”电视剧(人偶剧)，对其中的主角“库库”相当迷恋。由于爱使唤纯，被纯称为“诅咒人偶”(呪い人形)，然而也只会在纯的面前表现出脆弱与撒娇的另一面。与另一名蔷薇少女“水银灯”是死对头，遇上她就会失去平时的冷静，激动时会以“junk”(ジャンク 为垃圾或废物)称呼水银灯。其他讨厌的事物有猫、拉普拉斯之魔、黑暗。对于爱丽丝游戏则希望由自己的方式来终结。
第六人偶:雏莓(ひないちご/ヒナイチゴ)Kleine Beere CV：野川樱/金田朋子
玫瑰少女系列的第六人偶，人工精灵是(ベリーベル)。初登场时与“柏叶巴”订下契约，爱哭怕寂默的个性，虽然看起来人畜无害，但在跟真红进行爱丽丝游戏中差点把原媒介巴的力量消耗殆尽，在后悔之余赶紧解除契约才保住了巴的生命。在败给真红后以真红为间接媒介从纯获得活动的力量，甘愿作真红的仆人，从此就在樱田家住下来。在自己的领域中拥有将布偶巨大化的能力，主要攻击武器是从身上蔓生的草莓藤来困住敌人的行动。喜爱吃甜食，特别是“草莓大福”以及樱田纪作的“花蛋汉堡”(花丸ハンバーグ)。兴趣是涂鸦，以及跟真红一起看“侦探库库”，平常在嘴边也常常哼著自己随意唱的歌。个性天真单纯，总是被翠星石欺负，受到纪的溺爱，但总是很依赖的她，在跟众人相处之下也慢慢改变了，有独力想完成的事情(见动画二期第五话或漫画版番外篇)。被翠星石戏称“小小鬼头莓”(チビチビ莓)。雏莓似乎不常使用人工精灵，导致人工精灵自信心不足而畏畏缩缩。雏莓说话结尾会有“...なの～”的语癖，宛如小孩子的口气，困惑的时候则会发出“うにゅ～”的声音。
第七人偶:蔷薇水晶(伪)(ばらすいしょう/バラスィショウ)Rosen Kristall CV：后藤沙绪里/无登场
玫瑰少女系列的第七人偶，由槐制作的伪第七人偶，人工精灵目前不明。充满谜团的最终蔷薇少女，最大的特色是眼睛上的紫色玫瑰(动画版是左眼上面有玫瑰造型的眼罩，漫画版则是在右眼的位置为一朵紫色玫瑰)，有著异于其他人偶的衣物造型风格(动画版是淡紫色，漫画版则偏白色)。战斗能力强，从地面形成的紫水晶为主要攻击武器，单手能形成类似护壁阻挡攻击(动画版)。沉默寡言，但有著喜欢重复对方说话的奇怪语癖，面无表情，遇上强敌时会显露出笑容，属于好战派(动画版)。后因无法承受其他六位人偶的蔷薇圣母而自我崩坏。
第七人偶：雪华绮晶:
玫瑰少女第七人偶，漫画连载第35话名字公开，人工精灵不详。独眼，和蔷薇水晶不同在于她是在右眼处生出一朵白色玫瑰自然覆盖，服装也以白色为主基调。但两人都有重复对方说话的奇怪语癖。罗真为了创造出Alice走向极端，在制作雪华绮晶时甚至连她在物质世界的身体也舍弃，因此雪华绮晶是没有实体的，只能在虚拟世界中出现。可惜即使这样雪华绮晶依然不能成为Alice，为了补完自己，她夺取了雏莓的身体准备参加Alice Game，由于得到了实体，因此她也可以出现在现实中
樱田纯(桜田ジュン) CV：真田アサミ/小林沙苗
本作的男主角，因不明原因不肯上学，总是躲在房间且热衷于网络邮购的封闭少年，国中二年生，对于亲姊姊“樱田纪”的关心相当不以为然，常用斥责或命令的口气交谈，然而在遇上真红等人偶后渐渐的打开心防。被真红视为仆人而总是被使唤，本身虽不愿意但也无可奈何，同时也被翠星石戏称为“小鬼头人类”(チビ人间)。拥有修复娃娃的高超裁缝手艺并能将迷失的灵魂唤回，甚至能将真红失去的手臂完整修复，此能力必须要有如罗真般大师级的手艺才能办到。最初与真红订下契约，在雏莓败给真红后也透过真红间接使用纯的力量，而之后在危急的情况下又与翠星石缔结契约，实质上为三名人偶的媒介(Medium ミーディアム)。
樱田纪(桜田のり) CV：力丸乃りこ/久川绫
台湾长鸿翻樱田典子，纯的亲姐姐，高中生，代替在海外工作的双亲照顾纯，非常关心纯的状况到了溺爱的程度。天然呆的个性像个傻大姐，对于命令如泡红茶等会立刻去执行。家事全能并拥有高超的厨艺，拿手料理“花蛋汉堡”(花丸ハンバーグ)深受人偶们的喜爱。平常的个性很随和温柔，即使纯总用命令的口气跟她说话也无所谓，但是一旦生气起来却是相当可怕的(见动画一期第五话或漫画第14话)。在学校是曲棍球(Lacrosse ラクロス)社的一员。
柏叶巴 CV：仓田雅世/川澄绫子
纯的青梅竹马，同时也是纯的同班同学，雏莓的原媒介。最初与雏莓订下契约时因为疼爱且因无法长时间陪伴雏莓的内疚，导致对雏莓的放纵，。在雏莓与真红进行爱丽丝游戏时，由于雏莓过度使用力量导致巴陷入濒死边缘，在雏莓紧急解除契约下挽回一命。在学校是剑道社一员，自幼与父亲学习剑道，同时也担任学级委员，是个模范生。
山本君 CV：间岛淳司
(仅于动画登场)暗恋纪的同班同学，每次想约纪的时候总是遇上不幸的状况而失败。
柴崎元治 CV：西川几雄
(仅于动画登场)动画版苍星石的媒介，是个年逾半百的钟表店师父，在失去儿子与妻子昏迷不醒的双重打击下，将苍星石误认为儿子“一树”(かずき)，对苍星石有著扭曲的亲情而不让苍星石在箱子里睡觉，在妻子苏醒后承认儿子已死的事实。
结菱一叶
(仅于漫画原作登场)漫画原作苍星石的契约者。因为双胞胎弟弟“结菱二叶”与爱人远走高飞而深受背叛的感觉，然而二叶在船难中丧身，因此想对幸存的二叶爱人实行报复行动。翠星石无法认同而独自离开到樱田家。
结菱二叶
(仅于漫画原作登场)一叶的双胞胎弟弟，与未婚妻私奔却不幸死于船难之中。
梅冈老师
(仅于漫画原作登场)纯的班导师，年轻认真，很想帮助纯回到校园生活，但是不了解其中的原委。
柿崎惠(柿崎めぐ) CV：河原木志穗
动画版中水银灯的媒介(漫画版则尚未缔结契约)，是个有先天性心脏病的少女，必须进行换心手术才有可能存活，对自身的命运感到无奈而厌世。称自己是“坏掉的孩子”(壊れた子)，视水银灯为将带走自己生命的“天使”。喜欢唱歌(动画版与漫画所唱的歌是不同的)。
小美(みっちゃん) CV：川濑晶子
金糸雀的媒介，是个无药可救的人偶狂热者，职业是OL。由于本身热爱人偶尔相当溺爱金糸雀，对于其他蔷薇少女的存在非常感兴趣。料理也很在行，总是帮金糸雀准备便当，其中的玉子烧更是金糸雀的最爱。
白崎 CV：樱井孝宏
(仅于动画登场)谜样的人偶店店员，与蔷薇水晶似乎有著某种关系。
槐(エンジュ) CV：小野大辅
(仅于动画登场)有著人偶口中“父亲”模样的谜样人偶师。
罗真(ローゼン)
长鸿译蔷薇，制作出梦幻的蔷薇少女系列人偶的神秘人偶师，也就是人偶们口中的“父亲大人”，为了重现最完美的少女“Alice”而使用蔷薇圣母制作出七名蔷薇少女，然而没有一个人偶达到Alice的境界，在悲伤之余行踪成谜，现在可能于n领域的某处。人偶们进行Alice Game互相夺取蔷薇圣母为的就是成为Alice与父亲重逢。
侦探库库(探侦くんくん) CV：津久井教生
长红译汪汪，真红等人所热衷于观赏的电视剧(人偶剧)主角，外型是狗布偶。在剧中是冷静沉著的侦探，在每次的案件都能逢凶化吉，并且抽丝剥茧厘清案情，连真红都难逃其魅力。真红总是称赞：“库库是天才喔”，并在动画一期第五话“阶梯”(漫画第14话)中被纯用腹语术假装的库库人偶耍的团团转，其迷恋的程度可见一斑。
拉普拉斯之魔(ラプラスの魔) CV：津久井教生/中田让治
在n领域中徘徊的谜样兔子，身穿燕尾服，总是说著不著边际的话，对于爱丽丝游戏似乎有一定程度的关联。
名词解释：媒介
Medium，与蔷薇少女订下契约的人类。成为媒介者会提供自身的能量给予蔷薇少女活动的力量，在有媒介的情况下，蔷薇少女才能在现实世界中使用特殊能力，而战斗时媒介的存在对于胜负也是相当重要的因素。
蔷薇戒指
媒介与蔷薇少女之间契约的证明，在契约取消前不会消失也无法取下。在原作漫画中缔结契约的方式是由蔷薇少女取得戒指，戴上后自己亲吻戒指表示契约形成，而动画版则是契约者必须亲吻在蔷薇少女手上的戒指，表示契约形成，此时会在自己手指上形成戒指。
爱丽丝
Alice，唯一纯洁无暇而且象征完美的少女。是蔷薇少女们所追求的目标。
爱丽丝游戏
Alice game
蔷薇少女的宿命，必须互相战斗夺取彼此的蔷薇圣母，最终获胜取得全部蔷薇圣母的蔷薇少女可成为爱丽丝。
蔷薇圣母
Rosa Mystica，蔷薇少女生命的来源，失去蔷薇圣母的蔷薇少女就会成为一般的人偶。
n之领域
虚与实，正与负，什么都存在也什么都不存在的世界。
世界树
存在于梦世界的巨树，连接著所有人类的心之树。
潜意识之海
存在于n领域中的特殊区域，夹杂现在过去未来的时间洪流，包含所有一切思绪与记忆之海，若走在浅摊上则会看到许多幻觉。
人工精灵
蔷薇少女所操控的精灵。拥有不可思议力量的精灵，每个蔷薇少女都有一只，帮助蔷薇少女寻找媒介，战斗时也是蔷薇少女不可或缺的帮手
皮箱
蔷薇少女沉睡时所放置的箱子，镶著蔷薇的标志，蔷薇少女平时也必须在皮箱内睡觉才能获得真正的休息。翠星石与苍星石可将皮箱当作飞行交通工具