primer5引物设计结果怎么看

通过引物的参数检测引物设计参数：a引物长度一般在20bp左右，上下游引物碱基长度不要相差超过4个碱基。

b引物退火温度一般在58度，不同软件TM使用不同的算法，primer3，primer5，primer6，primerexpress等一般可以设置在55-58度，beacondesign可以设置在65左右。

cGC含量一般没什么特殊要求，40-60最好，如果不好设计，30-80也是可以的。

d产物长度在100-150,80-200也可以，不要在50bp左右，那样和引物二聚体不好区分，超过200bp可能会影响PCR扩增。

e软件给出的引物不能有发卡结构和超过3-4个碱基的匹配，特别是3`端不能有碱基匹配，那样更容易形成二聚体。

f引物设计好以后，在NCBI上做一个primer-blast，检测一下是否有非特异性扩增。

最好还是通过实验验证，如果是定量PCR引物a溶解曲线单峰，窄而尖，否则可能有非特异性扩增；