使用primer premier5.0设计引物

点文件，选新建DNA序列（File——New——DNA Seqence）然后把要设计引物的序列复制进去就行了（如果你要是愿意也可以一个一个碱基的打进去），然后点Primer进入到引物设计界面，进去后选点 Search 设置相应相应的条件，如：你要设计PCR扩增还是测序引物，是正向、反向还是双向，在片段中的那个位置设计及引物的长度等等，设置好后一路OK点下去就行了，然后就会有引物出来供你选择了。

哈哈不过具体的步骤1L那个网址好像已经给出了，不过在设计引物时LZ还要注意些条件，如TM值和GC一类的，还有引物长度等等^_^

反正我一般设计引物的时候TM和GC都控制在50-60之间，长度一般18或19个碱基（555合成的时候按碱基收费呀555），错配和发卡都没有，不过引物二聚体有的话问题倒是不大（反正我设计出来有二聚体的引物基本都OK）然后就是最好不要有4个或以上连续的碱基，再有就是不要在重复序列里设计引物。